张辉,潘鲁青,岳峰

• 1:中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室

摘要(Abstract)：

溶菌酶能破坏和消除侵入体内的病原或异物,是甲壳动物免疫系统中一个重要的效应分子。本文根据克隆得到的三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)C-型溶菌酶基因(Lysozyme)全长序列,设计带有酶切位点的特异性引物,经RT-PCR扩增得到溶菌酶基因(PtLys)的开放性阅读框,将其克隆至载体pMD18-T,并测序。用限制性内切酶BamH I和XhoI双酶切取目的基因,并与表达载体pET-28a(+)连接,构建了PtLys基因的原核表达载体p28a-PtLys,在大肠杆菌(E.co-li)BL21(DE3)中诱导表达含6个His标签的重组PtLys融合蛋白,经带有His标签的Ni 2+亲合层析柱纯化得到三疣梭子蟹重组溶菌酶蛋白,并进行活性检测。结果表明:重组载体p28a-PtLys转化E.coli BL21(DE3)后,可以实现PtLys基因的原核表达,经SDS-PAGE分析显示在33.29kD处有显著诱导条带,与预测的分子量大小基本一致;经Western blot分析,可与anti-His抗体特异性结合;抑菌实验表明,对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)和鳗弧菌(Vibrio anguillarum)均有一定的抑菌作用。本研究成功实现了三疣梭子蟹C-型溶菌酶基因的原核表达,为甲壳动物溶菌酶的进一步开发应用提供了技术支持。

关键词(KeyWords)： 三疣梭子蟹;C-型溶菌酶;原核表达;抑菌活性

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家高技术研究发展计划项目(2012AA10A409)资助

作者(Author): 张辉,潘鲁青,岳峰

DOI: 10.16441/j.cnki.hdxb.2013.07.004

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