单环刺螠纤溶酶的分离纯化及溶栓活性的初步研究Purification and Biological Activity of Fibrinolytic Enzyme from Urechis unicinctus
蒋仲青,刘万顺,韩宝芹,朱琦
摘要(Abstract):
从单环刺螠中分离提取出具有溶栓功效的纤溶酶(UFE),并对其理化性质进行初步研究。单环刺螠组织液经Sephadex G-75凝胶过滤层析、DE52离子交换层析和Sephacryl S-100HR凝胶过滤层析三步分离纯化,获得单一活性组分,分别观察pH值、温度和金属离子对该酶活性的影响,并对其体外溶栓活性进行研究。经SDS-PAGE凝胶电泳和高效液相色谱表征,该酶为单一蛋白,其分子量约为26 kD。该酶的最适pH为8.0,最适温度约为50℃,能被Cu2+、Fe2+和Fe3+抑制,Mg2+激活。纤维蛋白平板实验证实该酶有激酶活性,体外溶栓实验表明其溶栓效果良好。经过三步分离纯化流程可得单一组分的单环刺螠纤溶酶,为其进一步研究和开发提供了实验依据。
关键词(KeyWords): 单环刺螠;纤溶酶;纯化;酶学性质
基金项目(Foundation): 国家高技术研究发展计划重点课题(2009ZX09103-646)资助
作者(Author): 蒋仲青,刘万顺,韩宝芹,朱琦
DOI: 10.16441/j.cnki.hdxb.2009.s1.027
参考文献(References):
- [1]Yu I T S,Li W T.Wong T W.Effects of age,period and cohort onacute myocardial infarction mortality in Hongkong[J].Inter J Cardi-ol,2004,97:63.
- [2]赵友春,赵淑梅,王革,等.第三代溶血栓药物研究进展[J].药学进展,2003,28(2):72.
- [3]张彬,孙晓江.溶栓药物的基础和临床研究的新进展[J].中国临床神经科学,2008,16(1):108-111.
- [4]杜平中.溶栓药物研究新进展[J].中国新药杂志,2001,10(8):573-577.
- [5]彭先凤,曾蓉,陈丽波,等.药用纤溶酶的制备及其性质研究[J].华西药学杂志,1998,13(1):19-21.
- [6]Haug T,Klara S K,Olsen Q M,et al.Antibacterial activities in vari-ous tissues of the horse mussel,Modiolus modiolus[J].Journal ofLnver Sandsdalen E,Styrvol Tebrate Pathology,2004,85:112.
- [7]璩竹玲,刘赛,刘晨光,等.海洋假单胞菌碱性蛋白酶的纤溶及抗血栓形成作用[J].青岛大学医学院学报,2003,39(2):156.
- [8]郭瑛,李奇,姜广智,等.溶栓素的药效学研究[J].长春中医学院学报,2003,19(2):33.
- [9]Chisholm J R S,Smith V J.Comparison of antibacterial activity inthe hemocytes of different crustacean species[J].Comp BiochemPhysiol,1995,110A(1):39.
- [10]Yokokawa F,Sameshima H,In Y,et al.Total synthesis and con-formational studies of ceratospongamide,a bioactive cyclic heptapep-tide from marine origin[J].Tetrahedron,2002,58:8127.
- [11]Shahidi F,JanakKamil Y V A.Enzymes from fish and aquatic inver-tebrates and their application in the food industry[J].Trends FoodSci Tech,2001,12:435.
- [12]汪家政,范明.蛋白质技术手册[M].北京:科学出版社,2000.
- [13]伊德林,江岩.用Folin-酚试剂法测定双胸蚓溶栓酶活性[J].沈阳医学院学报,1998,12(3):49-50.
- [14]郝苏丽,沈佳.蚓激酶生物活性检测方法的研究[J].中国药事,1996,10(6):403-405.
- [15]Astrup T,Mullertz S.The fibrin plate method for estimating fibri-nolytic activity[J].Arch Biochem Biophys,1952,40:346-351.
- [16]唐绍庆,韦世秀.纤维蛋白溶解酶试管定量测定法[J].中国药理学与毒理学杂志,1987,1(5):381-383.
- [17]石岩,梅世昌.医学动物实验使用手册[M].北京:中国农业出版社,2002:28-31.
- [18]Wang D,Liu W,Han B,et al.Biochemical and enzymatic proper-ties of a novel marine fibrinolytic enzyme fromUrechis unicinctus[J].Appl Biochem Biotechnol,2007,136(3):251-264.
文章评论(Comment):
|
||||||||||||||||||
|
||||||||||||||||||